Die Zweifarbfledermaus ist mit einer Körperlänge von 55 – 63 mm und einem Gewicht von 12 – 20 g eine mittelgroße Fledermausart. Im Flug erscheint sie mit einer Spannweite von 26 – 30 cm etwa so groß wie eine Schwalbe.

Von Nähe gesehen ist sie unverkennbar, denn sie gehört zu unseren besonders schön gefärbten Fledermausarten. Das Rückenfell erscheint zweifarbig (Name), die Basis ist dunkel mit silbernen Spitzen.

Der Bauch ist reinweiß und die Flughäute, das Gesicht und die Ohren sind im Kontrast dazu sehr dunkel gefärbt. Typisch sind auch ein schwarzer und ein cremefarbener Fleck hinter dem Ohr.

Aus NRW liegen nur wenige Funde vor, die sich aber im Ruhrgebiet und im Kölner Raum konzentrieren. Auffällig ist dabei, dass sie häufig in Hochhäusern gefunden werden. Bislang sind von der Zweifarbfledermaus bei uns jedoch keine Wochenstubenquartiere bekannt geworden.

In Ostdeutschland und in Süddeutschland sind bislang Kolonien dieser Art gefunden worden. Die Sommerquartiere liegen zumeist in Gebäuden. Diese Art kann weite Wanderungen unternehmen. Über 1000 km sind bereits nachgewiesen. Den Winter verbringen die Tiere in Felsspalten und unterirdischen Verstecken.

Die Zweifarbfledermaus jagt im offenen Luftraum nach Insekten, besonders Käfer und Nachtschmetterlinge.